Data/hora: 13/06/2024 01:10:49

Provedor de dados: | 102
País: | Brazil
Título: | Expressão em Escherichia coli da proteína capsidial do Watermelon mosaic virus e produção de anti-soro
Autores: | Barbieri,Manuela R.; Carvalho,Murilo G. de; Zambolim,Eunize M.; Zerbini,F. Murilo.
Data: | 2004-04-01
Ano: | 2004
Palavras-chave: | Cucurbitáceas; ELISA; Imunodifusão; Western blot.
Resumo: | Um anti-soro policlonal específico para Watermelon mosaic virus (WMV) foi produzido por meio da imunização de coelhos com proteína capsidial purificada, expressa in vitro em células de Escherichia coli. O gene cp foi amplificado via RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos, a partir de RNA viral extraído de preparações virais concentradas. O fragmento amplificado foi clonado em pBLUESCRIPT KS+ e completamente seqüenciado para confirmação de sua identidade e integridade. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-A. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína capsidial em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni+-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. Uma vez purificada, a proteína foi quantificada e utilizada para imunização dos coelhos. O anti-soro foi testado quanto a sua especificidade e sensibilidade em testes de Western blot, DAS-ELISA, imunodifusão e ELISA indireto. Todos os testes demonstraram que o anti-soro produzido a partir da expressão in vitro da proteína capsidial é altamente específico para a detecção do WMV em extratos foliares, não tendo sido observada nenhuma reação heteróloga interespecífica.
Tipo: | Info:eu-repo/semantics/article
Idioma: | Português
Identificador: | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-41582004000200017
Editor: | Sociedade Brasileira de Fitopatologia
Relação: | 10.1590/S0100-41582004000200017
Formato: | text/html
Fonte: | Fitopatologia Brasileira  v.29 n.2 2004
Fonte: | info:eu-repo/semantics/openAccess