Data/hora: 10/06/2024 03:57:37

Provedor de dados: | 14
País: | Brazil
Título: | Replicação de um baculovírus recombinante contendo o gene rolA de Agrobacterium rhizogenes em cultura de células de inseto.
Autores: | FERREIRA, B. C.; SIHLER, W.; CARNEIRO, M.; SOUZA, M. L. de.
Data: | 2006-07-10
Ano: | 2005
Palavras-chave: | Baculovírus recombinante - replicação; Gene rolA; Agrobacterium rhizogenes; Células - inseto- cultura.
Resumo: | As características morfológicas conferidas a plantas infectadas por Agrobacterium rhizogenes têm como principal responsável o gene rolA. Entre as anomalias causadas por esse gene estão a redução do tamanho da planta, inibição do crescimento da raiz e retardo na floração. Em trabalhos anteriores foi construído um baculovírus recombinante com o gene rolA no locus do gene da poliedrina. O gene rolA foi clonado no vetor pFastBac HTb usado para transformação em células DH10Bac cells (Invitrogen), que contêm o genoma viral de Autographa californica Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Este DNA viral recombinante foi cotransfectado em células de inseto Sf9 resultando em um vírus deficiente na produção da poliedrina, o qual foi chamado de v-rolA (Sihler et al, 2002). No presente trabalho foi investigada a infecção do vírus v-rolA nas diferentes linhagens celulares de Trichoplusia ni (Tn5B1-4) e de Spodoptera frugiperda, IPLB-SF-21AE e Sf9. O inóculo viral foi removido depois de uma hora de adsorção e as células foram incubadas em meio TNMFH a 27°C por 48h. O progresso de infecção foi monitorado por microscopia óptica. Alterações morfológicas como hipertrofia nuclear e formação de corpo denso foram observados nas células Tn5B1-4, SF21 e Sf9 após 24h. O DNA do vírus recombinante foi extraído de células infectadas, digeridas com enzima Pst I e amplificado através da técnica de PCR. As amostras de DNA foram analisadas por eletroforese em gel de agarose mostrando que o vírus se replicou em todas as linhagens celulares.
Tipo: | Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)
Idioma: | Português

Identificador:

26831

http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/187228

Editor: | Brasília: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2005.

Relação:

Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia - Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)

(Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 111)

Formato: | 18p.