Data/hora: 16/06/2024 00:42:06

Provedor de dados: | 32
País: | Mexico
Título: | Transformación genética de Paulownia elongata  mediada por Agrobacterium tumefaciens y por biobalística
Autores: | Castillo Martínez, Carlos Roman.
Data: | 2012-09-08
Ano: | 2007
Palavras-chave: | Árboles transgénicos; Agrobacterium tumefaciens; Transformación por aceleración de partículas; Doctorado; Genética; Transgenic trees; Particle acceleration transformation.
Resumo: | Se establecieron las condiciones más propicias para transformar  genéticamente mediante sistemas directos (biobalística) e indirectos  (Agrobacterium tumefaciens), Paulownia elonganta. Se partió desde su  propagación in vitro, a través de organogénesis indirecta y directa,  encontrando como mejor explante inicial para dicha respuesta segmentos  internodales de 0.5 a 1.0 cm de longitud, con una combinación de reguladores  de crecimiento de 4 mg L-1 de BA y 0.2 mg L-1 de ANA, generándose 1.33  brotes por explante en promedio. Para la formación de callo a partir de este  tipo de tejido el mejor balance fue con TDZ 4 mg L-1, donde más de 80% de  explantes forman callo a los 10 días. Se estableció como dosis óptima para el  medio de selección 15 mg L-1 de kanamicina. Se pudieron obtener plantas  transformadas tanto por transformación mediada por Agrobacterium  tumefaciens, con 2 horas de incubación, 48 horas de co-cultivo y densidad  óptica de 0.9; así, como por biobalística, con 120 PSI de presión de disparo a  una altura del nivel 6 (16 cm) del sistema y una presión de vacío de 22 mm  Hg, usando el sistema de aceleración de partículas de baja presión (PIG). Con  los dos sistemas se obtuvieron transformantes confirmados por prueba  histoquímica de X-GLUC y por PCR, de ésta última, 14 positivos generados  por A. tumefaciens de 26 ensayos y 10 obtenidos por biobalística de 30  ensayos, en ambos casos se usó una construcción que contenía los genes de  interés quitinasa y glucanasa, el gen de selección NPT II y el gen reportero  GUS. Este es el primer reporte de la integración de los genes quitinasa y  glucanasa en P. elongata.__________The most appropriate conditions for genetic transformation through direct  (bioballistic) and indirect (Agrobacterium tumefaciens) transformation systems in  Paulownia elongata, were stablished. Starting from in vitro propagation through  both direct an indirect organogenesis, internodal stem segments with 0.5 to 1.0 cm  in length were determined as the best explant for such a response, in combination  with growth regulators at doses of 4 mg L-1 BA and 0.2 mg L-1 ANA, resulting in of  1.33 shoots per explant as an average; whereas for callus formation with the same  type of explant he best balance was obtained with TDZ 4 mg L-1, producing more  than 80% of explants with callus after 10 days. The optimum dose for selection  media was determined to be15 mg L-1of kanamycin. It was possible to obtain  transgenic plants under both transformation systems. In the case of Agrobacterium  tumefaciens, 2 hours of incubation, 48 hours of co-cultivation and optical density of  0.9 were used; while in the biobalistics case, the best conditions were 120 PSI of  shot pressure, shot height in level 6 and vaccum of 22 Hg mm, with the particle  inflow gun system (PIG). Both systems produced complete transformants as well  as chimeras as, confirmed by histochemical analysis X-GLUC and PCR, producing  a total of 14 positive plants by A. tumefaciens transformation from 26 trials and 10  posive plants by the biobalistics system from 30 trials; a construction with chitinase  and glucanase genes, NPT II selection gene and the GUS reporter gene was used  in both systems. This is the first report so far that includes integration of chitinase  and glucanase genes into P. elongata.
Tipo: | Tesis
Idioma: | Espanhol
Identificador: | http://hdl.handle.net/10521/1458