Data/hora: 08/06/2024 13:36:05

Provedor de dados: | 65
País: | Brazil
Título: | Otimização da técnica da PCR para a detecção de Actinobacillus pleuropneumoniae
Autores: | Souza,Karina Koerich de; Klein,Catia Silene; Kich,Jalusa Deon; Coldebella,Arlei; Alberton,Geraldo Camilo.
Data: | 2008-11-01
Ano: | 2008
Palavras-chave: | PCR; Gene cpx; Tonsila; Actinobacillus pleuropneumoniae; Pleuropneumonia suína.
Resumo: | A utilização de métodos moleculares baseados em PCR é fundamental na detecção do Actinobacillus pleuropneumoniae, sendo capaz de identificar a infecção antes do estabelecimento da doença no rebanho. Estes métodos apresentam maior sensibilidade quando comparados com métodos tradicionais de isolamento bacteriano, mas podem sofrer influência de substâncias que reduzem a especificidade do teste e proporcionam o aparecimento de amplificações inespecíficas. No intuito de reduzir as amplificações inespecíficas, observadas quando aplicada a PCR para o gene cpx em amostras de tecido tonsilar, procedeu-se a otimização da técnica, na qual foram analisados o efeito do pré-cultivo bacteriano e as diferentes temperaturas de anelamento dos iniciadores e foi introduzido, no protocolo, um anticorpo que se liga na enzima Taq DNA Polimerase, aumentando a especificidade do teste. Paralelamente, foi realizado um experimento para verificar o efeito inibidor do tecido tonsilar sobre os resultados da PCR. Para isso, porções de tonsila de animais negativos para A. pleuropneumoniae foram contaminadas artificialmente com a amostra referência do sorotipo 5B. A adição do anticorpo para a enzima Taq DNA Polimerase e o aumento da temperatura de anelamento dos iniciadores para 57°C diminuiu o aparecimento de amplificações inespecíficas. Os resultados obtidos no experimento demonstraram que o tecido tonsilar possui efeito inibidor nas amplificações da PCR. Além disso, a amplificação depende de, no mínimo, 675 UFC presentes na alíquota da amostra usada na PCR (equivalente a 1,35 x 10(5) UFC mL-1), assim, amostras de fragmentos de tecido de infecções iniciais e/ou com poucas células podem apresentar resultados falsos negativos.
Tipo: | Info:eu-repo/semantics/article
Idioma: | Português
Identificador: | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782008000800023
Editor: | Universidade Federal de Santa Maria
Relação: | 10.1590/S0103-84782008000800023
Formato: | text/html
Fonte: | Ciência Rural  v.38 n.8 2008
Fonte: | info:eu-repo/semantics/openAccess