Data/hora: 08/06/2024 17:24:19

Provedor de dados: 	20	
País: 	Belgium	
Título: 	Aislamiento, clonaje y caracterización biológica del ADN  complementario de la Hormona Hiperglucemiante de Crustáceos de  Litopenaeus schmitti (Decapoda: Penaeidae)	
Autores: 	Yuliet Morera Darias.	
Data: 	2014-07-03	
Ano: 	2009	
Palavras-chave: 	Marine shrimp culture; Anatomical structures; Functional analysis.	
Resumo: 	El desarrollo alcanzado en la camaronicultura hasta el presente exige estudios cada vez más  novedosos en vista a enfrentar nuevos retos. En este sentido resulta necesario el conocimiento de  la estructura-función de los neuropéptidos de la familia de la Hormona Hiperglucemiante de  Crustáceos (familia HHC). Ella  juega un importante papel en el metabolismo y la fisiología  influyendo directamente sobre la muda, el crecimiento, la reproducción, el metabolismo de la  glucosa y lípidos, entre otras. La Hormona Hiperglucemiante de Crustáceos (HHC) es el  componente mayoritario de la familia HHC y el único neuropéptido aislado y secuenciado hasta  el presente. Ella es una hormona pleiotrópica y su función principal es regular el nivel de glucosa  en la hemolinfa. La purificación de los neuropéptidos a partir de su fuente natural de expresión  requiere de cientos de pedúnculos oculares de camarón. Mientras que la obtención del ADN  complementario (ADNc) que codifica para la HHC de pedúnculo ocular es una alternativa para  obtener la HHC en cantidades suficientes y biológicamente activa para posteriores estudios  biológicos en camarones peneidos. En este trabajo, conociendo la secuencia aminoacídica de la  HHC de Litopenaeus schmitti, se diseñaron oligonucleótidos degenerados capaces de aislar el  ADNc de la HHC en camarones peneidos. Como resultado se obtuvo por primera vez el ADNc  de 216 pares de bases que codifica para la región madura de la HHC de L. schmitti. Los análisis  de secuencia del fragmento amplificado por TR-RCP revelaron una alta homología con otras  HHC en camarones peneidos. El análisis de la expresión tejido-específica de la HHC por  Northern blot, mostró que el ARN mensajero (ARNm) de la HHC está presente en el pedúnculo  ocular pero no se encuentra en músculo y estómago. Sin embargo, el análisis semicuantitativo de  TR-RCP reveló su presencia en los tres tejidos. Para contar con suficiente cantidad de la HHC  biológicamente activa, en este trabajo se clonó el ADNc (216pb) de la HHC de L. schmitti en el  vector de expresión pTYB2. Como resultado se obtuvo la HHC recombinante expresada en E.  coli como proteína de fusión a la inteina y formando parte de los cuerpos de inclusión. La  purificación de la proteína de fusión se realizó por el método de electroelusión. La HHC  recombinante mostró capacidad para incrementar el nivel de glucosa en la hemolinfa in vivo en Litopenaeus vannamei. Los animales con ablación bilateral del pedúnculo ocular inyectados con  la HHC recombinante mostraron una actividad hiperglicémica semejante a la mostrada por el  grupo control positivo (animales sin ablación inyectados con PBS). Mientras que, se observaron  diferencias significativas en la concentración de glucosa respecto a los grupos control negativo  que consistieron en animales con ablación bilateral del pedúnculo ocular inyectados con la  proteína inteina (p&lt;0.05) o PBS (p&lt;0.05). Por otra parte, en nuestro trabajo nos propusimos  comprobar la funcionalidad del novedoso mecanismo del ARNi en camarón in vivo, por primera  vez, pues constituye el primer paso para determinar la función de genes desconocidos. Para ello  se sintetizó un ARN doble cadena (ARNdc) a partir del ADNc de la HHC de L. schmitti. Su  capacidad para silenciar la expresión del gen de la HHC se determinó por análisis de su función  biológica principal y del transcrito de la HHC. Se constató la disminución del nivel de glucosa  en la hemolinfa respecto a los grupos controles negativos tratados con un ARNdc no relacionado  (p&lt;0.05) y solución salina (p&lt;0.05). Los resultados de Northern blot y RT-PCR semicuantitativo  mostraron el silenciamiento del ARNm de la HHC 24 horas post-inyección solamente en el  grupo tratado con ARNdc de la HHC. Los resultados obtenidos son el comienzo de los estudios  básicos de los neuropéptidos de la familia HHC. La completa caracterización de todos sus  miembros será una importante herramienta para la manipulación controlada de la reproducción  en camarones peneidos.	
Tipo: 	Theses and Dissertations	
Idioma: 	Espanhol	
Identificador: 	http://hdl.handle.net/1834/5528	
Relação: 	Penaeus monodon: identification and functional characterisation of Dicer-1.  Fish Shell  Immunol 24(2): 223-33.  Suárez O, Ramos L, Martinez L y Huberman A (1996). Morfología del pedúnculo ocular en  los camarones P. schmitti y P. notialis. Rev. Invest. Mar. 17: 143-151.  Sun PS (1994). Molecular cloning and sequence analysis of a cDNA encoding a molt- inhibiting hormone-like neuropeptide from the white shrimp Penaeus vannamei. Mol Mar  Biol Biotechnol 3: 1-6.  Takeuchi K (2000). Cloning of Tilapia actin cDNAs. Published Only in DataBase In press.  Thompson JD, Plewniak F, Thierry J y Poch O (2000). DbClustal: rapid and reliable global  multiple alignments of protein sequences detected by database searches. Nucleic Acids Res  15: 2919-26.  Tirasophon W, Roshorm Y, Panyim S (2005). Silencing of yellow head virus replication in  penaeid shrimp cells by dsRNA. Biochem Biophys Res Commun 334(1): 102-7.  Tiu SH y Chan SM (2007). 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Formato: 	98	
Fonte: 	http://creativecommons.org/licenses/by-nc/3.0/