Data/hora: 09/06/2024 11:32:12

Provedor de dados: | 65
País: | Brazil
Título: | Produção de antissoro policlonal utilizando a proteína capsidial recombinante do Rupestris stem pitting-associated virus
Autores: | Basso,Marcos Fernando; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Ayub,Ricardo Antônio; Nickel,Osmar.
Data: | 2010-11-01
Ano: | 2010
Palavras-chave: | Videira; RSPaV; Detecção; Sorologia.
Resumo: | O Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) é o agente causal das caneluras do lenho da videira. Este trabalho teve como objetivo produzir antissoro policlonal a partir da proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV e avaliar a sua especificidade e sensibilidade. O gene da CP do RSPaV, com 780pb, foi previamente caracterizado. Esse gene foi subclonado no sítio de restrição EcoRI, no vetor de expressão pRSET-B e o plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da CP em Escherichia coli. A CP, ligada a uma cauda de seis histidinas, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA a partir do extrato de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot, utilizando-se anticorpos comerciais contra a cauda de seis histidinas. A CP recombinante expressada in vitro apresentou massa molecular de cerca de 31kDa. A proteína purificada foi quantificada e 2,55mg foram utilizados para a imunização de um coelho. O antissoro policlonal obtido reagiu com diferentes isolados deste vírus, extraídos de videiras em ELISA indireto.
Tipo: | Info:eu-repo/semantics/article
Idioma: | Português
Identificador: | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782010001100022
Editor: | Universidade Federal de Santa Maria
Relação: | 10.1590/S0103-84782010001100022
Formato: | text/html
Fonte: | Ciência Rural  v.40 n.11 2010
Fonte: | info:eu-repo/semantics/openAccess