Data/hora: 11/06/2024 13:57:39

Provedor de dados: | 95
País: | Brazil
Título: | Padronização da metodologia do RT-PCR utilizado para identificação do mRNA da alfa-amilase em sementes de milho
Autores: | Dantas,Bárbara França; Aragão,Carlos Alberto; Araújo-Junior,João Pessoa; Rodrigues,João Domingos; Cavariani,Cláudio; Nakagawa,João.
Data: | 2002-01-01
Ano: | 2002
Palavras-chave: | Zea mays; Sementes; Alfa-amilase; RT-PCR.
Resumo: | Durante a germinação das sementes, os carboidratos de reserva são degradados pela atividade de a-amilase. A identificação de mRNA é uma ferramenta fundamental para a definição da cinética de síntese de alfa-amilase. Objetivou-se padronizar a metodologia do RT-PCR para identificar o mRNA do gene de a-amilase em sementes de milho. Após três dias de germinação das cultivares Saracura-BRS 4154 e CATI-AL34, extraiu-se o RNA total pelo método do tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio, com algumas modificações. A partir do RNA total extraído foi obtido cDNA com utilização de "random primers". A amplificação por PCR de uma porção do gene da alfa-amilase foi realizada com os "primers": "sense" - CGACATCGACCACCTCAAC; "antisense" - TTGACCAGCTCCTGCCTGTC; gelatina; DMSO e 1,25 unidades de Taq DNA polimerase por reação e completados com água tratada com DEPC. Os ciclos para a amplificação foram 94ºC durante 4 minutos, seguidos por 34 ciclos de 94ºC durante 1 minuto, 42ºC durante 1 minuto e 72ºC durante 1,5 minutos e, finalmente, 72ºC por 5 minutos. O produto do RT-PCR apresentou uma banda de 249 pares de base (pb) bem definida, para as duas cultivares estudadas, não ocorrendo bandas inespecíficas. A técnica do RT-PCR mostrou ser uma metodologia eficiente para a identificação da expressão de alfa-amilase durante a germinação das sementes e pode ser usado para estudo qualitativo e quantitativo da cinética de síntese dessa enzima em experimentos de germinação.
Tipo: | Info:eu-repo/semantics/article
Idioma: | Português
Identificador: | http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0101-31222002000200019
Editor: | Associação Brasileira de Tecnologia de Sementes
Formato: | text/html
Fonte: | Revista Brasileira de Sementes  v.24 n.2 2002
Fonte: | info:eu-repo/semantics/openAccess