| Registro completo |
| Provedor de dados: |
Trop. Plant Pathol.
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| País: |
Brazil
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| Título: |
Expressão em Escherichia coli da proteína capsidial do Watermelon mosaic virus e produção de anti-soro
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| Autores: |
Barbieri,Manuela R.
Carvalho,Murilo G. de
Zambolim,Eunize M.
Zerbini,F. Murilo
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| Data: |
2004-04-01
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| Ano: |
2004
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| Palavras-chave: |
Cucurbitáceas
ELISA
Imunodifusão
Western blot
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| Resumo: |
Um anti-soro policlonal específico para Watermelon mosaic virus (WMV) foi produzido por meio da imunização de coelhos com proteína capsidial purificada, expressa in vitro em células de Escherichia coli. O gene cp foi amplificado via RT-PCR utilizando oligonucleotídeos específicos, a partir de RNA viral extraído de preparações virais concentradas. O fragmento amplificado foi clonado em pBLUESCRIPT KS+ e completamente seqüenciado para confirmação de sua identidade e integridade. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-A. Plasmídeos recombinantes foram utilizados para a expressão da proteína capsidial em E. coli BL21::DE3. A proteína foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni+-NTA, a partir de proteínas totais extraídas de E. coli. Uma vez purificada, a proteína foi quantificada e utilizada para imunização dos coelhos. O anti-soro foi testado quanto a sua especificidade e sensibilidade em testes de Western blot, DAS-ELISA, imunodifusão e ELISA indireto. Todos os testes demonstraram que o anti-soro produzido a partir da expressão in vitro da proteína capsidial é altamente específico para a detecção do WMV em extratos foliares, não tendo sido observada nenhuma reação heteróloga interespecífica.
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| Tipo: |
Info:eu-repo/semantics/article
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| Idioma: |
Português
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| Identificador: |
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-41582004000200017
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| Editor: |
Sociedade Brasileira de Fitopatologia
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| Relação: |
10.1590/S0100-41582004000200017
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| Formato: |
text/html
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| Fonte: |
Fitopatologia Brasileira v.29 n.2 2004
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| Direitos: |
info:eu-repo/semantics/openAccess
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