| Registro completo |
| Provedor de dados: |
Infoteca-e
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| País: |
Brazil
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| Título: |
Replicação de um baculovírus recombinante contendo o gene rolA de Agrobacterium rhizogenes em cultura de células de inseto.
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| Autores: |
FERREIRA, B. C.
SIHLER, W.
CARNEIRO, M.
SOUZA, M. L. de
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| Data: |
2006-07-10
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| Ano: |
2005
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| Palavras-chave: |
Baculovírus recombinante - replicação
Gene rolA
Agrobacterium rhizogenes
Células - inseto- cultura
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| Resumo: |
As características morfológicas conferidas a plantas infectadas por Agrobacterium rhizogenes têm como principal responsável o gene rolA. Entre as anomalias causadas por esse gene estão a redução do tamanho da planta, inibição do crescimento da raiz e retardo na floração. Em trabalhos anteriores foi construído um baculovírus recombinante com o gene rolA no locus do gene da poliedrina. O gene rolA foi clonado no vetor pFastBac HTb usado para transformação em células DH10Bac cells (Invitrogen), que contêm o genoma viral de Autographa californica Nucleopolyhedrovirus (AcMNPV). Este DNA viral recombinante foi cotransfectado em células de inseto Sf9 resultando em um vírus deficiente na produção da poliedrina, o qual foi chamado de v-rolA (Sihler et al, 2002). No presente trabalho foi investigada a infecção do vírus v-rolA nas diferentes linhagens celulares de Trichoplusia ni (Tn5B1-4) e de Spodoptera frugiperda, IPLB-SF-21AE e Sf9. O inóculo viral foi removido depois de uma hora de adsorção e as células foram incubadas em meio TNMFH a 27°C por 48h. O progresso de infecção foi monitorado por microscopia óptica. Alterações morfológicas como hipertrofia nuclear e formação de corpo denso foram observados nas células Tn5B1-4, SF21 e Sf9 após 24h. O DNA do vírus recombinante foi extraído de células infectadas, digeridas com enzima Pst I e amplificado através da técnica de PCR. As amostras de DNA foram analisadas por eletroforese em gel de agarose mostrando que o vírus se replicou em todas as linhagens celulares.
bitstream/CENARGEN/26831/1/bp111.pdf
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| Tipo: |
Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)
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| Idioma: |
Português
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| Identificador: |
26831
http://www.infoteca.cnptia.embrapa.br/infoteca/handle/doc/187228
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| Editor: |
Brasília: Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia, 2005.
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| Relação: |
Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia - Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento (INFOTECA-E)
(Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia. Boletim de Pesquisa e Desenvolvimento, 111)
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| Formato: |
18p.
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