| Registro completo |
| Provedor de dados: |
Rev. bras. sementes
|
| País: |
Brazil
|
| Título: |
Padronização da metodologia do RT-PCR utilizado para identificação do mRNA da alfa-amilase em sementes de milho
|
| Autores: |
Dantas,Bárbara França
Aragão,Carlos Alberto
Araújo-Junior,João Pessoa
Rodrigues,João Domingos
Cavariani,Cláudio
Nakagawa,João
|
| Data: |
2002-01-01
|
| Ano: |
2002
|
| Palavras-chave: |
Zea mays
Sementes
Alfa-amilase
RT-PCR
|
| Resumo: |
Durante a germinação das sementes, os carboidratos de reserva são degradados pela atividade de a-amilase. A identificação de mRNA é uma ferramenta fundamental para a definição da cinética de síntese de alfa-amilase. Objetivou-se padronizar a metodologia do RT-PCR para identificar o mRNA do gene de a-amilase em sementes de milho. Após três dias de germinação das cultivares Saracura-BRS 4154 e CATI-AL34, extraiu-se o RNA total pelo método do tiocianato de guanidina-fenol-clorofórmio, com algumas modificações. A partir do RNA total extraído foi obtido cDNA com utilização de "random primers". A amplificação por PCR de uma porção do gene da alfa-amilase foi realizada com os "primers": "sense" - CGACATCGACCACCTCAAC; "antisense" - TTGACCAGCTCCTGCCTGTC; gelatina; DMSO e 1,25 unidades de Taq DNA polimerase por reação e completados com água tratada com DEPC. Os ciclos para a amplificação foram 94ºC durante 4 minutos, seguidos por 34 ciclos de 94ºC durante 1 minuto, 42ºC durante 1 minuto e 72ºC durante 1,5 minutos e, finalmente, 72ºC por 5 minutos. O produto do RT-PCR apresentou uma banda de 249 pares de base (pb) bem definida, para as duas cultivares estudadas, não ocorrendo bandas inespecíficas. A técnica do RT-PCR mostrou ser uma metodologia eficiente para a identificação da expressão de alfa-amilase durante a germinação das sementes e pode ser usado para estudo qualitativo e quantitativo da cinética de síntese dessa enzima em experimentos de germinação.
|
| Tipo: |
Info:eu-repo/semantics/article
|
| Idioma: |
Português
|
| Identificador: |
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0101-31222002000200019
|
| Editor: |
Associação Brasileira de Tecnologia de Sementes
|
| Formato: |
text/html
|
| Fonte: |
Revista Brasileira de Sementes v.24 n.2 2002
|
| Direitos: |
info:eu-repo/semantics/openAccess
|
|
