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Production of polyclonal antisera using recombinant coat proteins of Grapevine leafroll-associated virus 2 and Grapevine virus B PAB
Radaelli,Paula; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Nickel,Osmar; Eiras,Marcelo; Pio-Ribeiro,Gilvan.
The objective of this work was to produce and characterize specific antisera against Brazilian isolates of Grapevine leafroll-associated virus 2 (GLRaV-2) and Grapevine virus B (GVB), developed from expressed coat proteins (CPs) in Escherichia coli, and to test their possible use for the detection of these two viruses in diseased grapevines. The coat protein (CP) genes were RT-PCR-amplified, cloned and sequenced. The CP genes were subsequently subcloned, and the recombinant plasmids were used to transform E. coli cells and express the coat proteins. The recombinant coat proteins were purified, and their identities were confirmed by SDS-PAGE and Western blot and used for rabbit immunizations. Antisera raised against these proteins were able to recognize the...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Vitis; GLRaV-2; GVB; Indirect ELISA; Recombinant protein; Western blot.
Ano: 2008 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-204X2008001000020
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Desempenho agronômico de videiras com e sem sintomas de viroses, e comparação molecular de isolados virais PAB
Nascimento,Monique Bezerra; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Czermainski,Ana Beatriz Costa; Nickel,Osmar; Pio-Ribeiro,Gilvan.
Resumo: O objetivo deste trabalho foi avaliar os efeitos de viroses em videiras sintomáticas e assintomáticas sobre as variáveis agronômicas relacionadas ao vigor das plantas e à qualidade enológica da uva, e comparar os isolados virais obtidos nessas duas condições. Realizaram-se dois experimentos com quatro cultivares. Todas as plantas foram indexadas, por meio da reação em cadeia da polimerase via transcrição reversa (RT-PCR) em tempo real, quanto à provável ocorrência dos seguintes vírus: Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine leafroll-associated virus (GLRaV-1 ao -4, GLRaV-4 estirpe 5), Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV) e Grapevine fleck virus (GFkV). As variáveis avaliadas foram:...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Grapevine; Vitis; Complexo do lenho rugoso; Enrolamento-da-folha; PCR em tempo real..
Ano: 2015 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-204X2015000700541
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Molecular characterization of GSyV-1 and GLRaV-3 and prevalence of grapevine viruses in a grape-growing area Scientia Agricola
Moura,Cátia Jacira Martins de; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Silva,Fábio Nascimento da; Nickel,Osmar.
ABSTRACT: The aims of this study were to determine the prevalence of viruses in 119 samples from 32 grapevine cultivars, collected from nine vineyards in a specific grape-growing area in southeastern Brazil, perform a partial molecular characterization of 14 isolates of Grapevine Syrah virus 1 (GSyV-1) and Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3) and assess the coat protein genetic variability of these viruses. The detection of viruses was implemented by real-time RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction) aiming to detect seven viruses and one viroid. With the exception of the Grapevine Cabernet Sauvignon reovirus (GCSV), the viruses and viroid that were evaluated were widespread in the sampled areas, often in high prevalence and...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Vitis; Diagnosis; Variability; Incidence; Leafroll.
Ano: 2018 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-90162018000100043
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Detecção e caracterização molecular dos genes da proteína capsidial de ilarvírus e ampelovírus que infectam fruteiras temperadas Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Nickel,Osmar; Eiras,Marcelo.
Dentre os principais patógenos que incidem em fruteiras temperadas, destacam-se o Prune dwarf virus (PDV), o Apple mosaic virus (ApMV) e o Grapevine leafroll-associated virus 1 (GLRaV-1). Neste trabalho foram realizadas a detecção e a caracterização molecular dos genes da proteína capsidial de isolados destas três espécies virais. RNAs totais foram extraídos de amostras de folhas de pessegueiros, macieiras e videiras e, nas reações de RT-PCR, foram utilizados oligonucleotídeos específicos para cada espécie viral. Os cDNAs amplificados foram clonados e sequenciados. Foram verificadas altas identidades entre as sequências de nucleotídeos dos genes da proteína capsidial dos isolados brasileiros de PDV, ApMV e GLRaV-1 e isolados de outros países, independente...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: PDV; ApMV; GLRaV-1; Pessegueiro; Macieira; Videira.
Ano: 2011 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782011000100002
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Molecular variants of Grapevine rupestris stem pitting-associated virus infecting grapevines (Vitis spp.) in Brazil Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Kin,Aléxis Cardama; Nickel,Osmar.
ABSTRACT: Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV) is one of the most common viruses of grapevine. It is involved in the graft-transmissible disease rupestris stem pitting of the rugose wood complex. The objective of the research was to perform the molecular characterization of the coat protein (CP) gene of sixteen Brazilian GRSPaV isolates aiming to determine the occurrence of molecular variants (strains) of this virus. Nine grapevine samples were evaluated, from which dsRNA was extracted. Nucleotide sequences were generated by Next generation sequencing (NGS). Fifteen complete sequences of the GRSPaV CP gene were obtained and phylogenetically analyzed. Multiple alignments of the sequences showed identities of nucleotides ranging from...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: GRSPaV; Foveavirus; Strains; Lineages; Genetic variability.
Ano: 2017 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782017001100153
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Absolute quantification of viruses by TaqMan real-time RT-PCR in grapevines Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Vanni,Marcos Fernando; Nickel,Osmar.
ABSTRACT: The absolute quantification determines the absolute amount of a targeted nucleic acid expressed as a copy number or concentration. The knowledge of virus concentrations in commercial crops possesses high relevance to ensure a reliable diagnosis. The objective of this study was to perform an absolute quantification of five viruses in infected grapevines (Vitis spp.). Different known amounts of the standard sample (cloned viral cDNA or in vitro transcribed viral RNA) were quantified by TaqMan RT-qPCR. Based on these data, standard curves were generated plotting Ct values (threshold cycle) against the log of the standard sample amount. Infected grapevine samples were evaluated to determine virus titers, which were highly variable. This result may...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: RT-qPCR; GRSPaV; GVA; GVD; GLRaV-3 and -4.
Ano: 2017 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782017000600155
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Incidência de vírus em videiras no Nordeste brasileiro e caracterização molecular parcial de isolados virais locais Ciência Rural
Catarino,Aricléia de Moraes; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Pio-Ribeiro,Gilvan; Eiras,Marcelo; Nickel,Osmar.
Os objetivos deste trabalho foram identificar as espécies virais presentes em vinhedos comerciais de duas regiões do Nordeste do Brasil e realizar a caracterização molecular parcial de isolados de três espécies virais. A diagnose foi realizada por meio de RT-PCR em tempo real para a detecção de Grapevine rupestris stem pitting-associated virus (GRSPaV), Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine leafroll-associated virus 2, 3 e 4 (GLRaV-2, -3 e -4), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine rupestris vein feathering virus (GRVFV) e Grapevine fanleaf virus (GFLV). Exceto para GFLV, os vírus avaliados estão amplamente disseminados nas áreas amostradas, frequentemente em altas incidências e em infecções múltiplas, de até 98% e 76,4%, na Zona da...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Proteína capsidial; Levantamento; Detecção; Variabilidade; Vitis.
Ano: 2015 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782015000300379
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v.40, n.11, p.2249-2255, nov, 2010 Ciência Rural
Basso,Marcos Fernando; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Ayub,Ricardo Antônio; Nickel,Osmar.
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article
Ano: 2011 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782011000200033
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v.40, n.11, p.2385.2388, nov, 2010 Ciência Rural
Basso,Marcos Fernando; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Ayub,Ricardo Antônio; Nickel,Osmar.
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article
Ano: 2011 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782011000200032
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Simultaneous detection of four viruses affecting apple and pear by molecular hybridization using a polyprobe Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Nickel,Osmar.
The viruses Apple stem grooving virus (ASGV), Apple chlorotic leaf spot virus (ACLSV), Apple stem pitting virus (ASPV) and Apple mosaic virus (ApMV) are common in apples and pears and main targets of detection in propagation materials. This study aimed at demonstrating the usefulness of the hybridization method with a non-radioactive probe for simultaneous detection of these four viruses. The sensitivity of this method was sufficiently high enabling the detection of ASGV, ACLSV, ASPV and ApMV in total RNA extracted from infected samples. The probe specificity was confirmed by reaction with homologous viral cDNA, individually cloned for each virus.
Tipo: Info:eu-repo/semantics/report Palavras-chave: Diagnosis; Malus; Pyrus; Polyprobe; ASGV; ACLSV; ASPV; ApMV..
Ano: 2014 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782014001001711
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Molecular characterization of Prunus necrotic ringspot virus isolated from rose in Brazil Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Nascimento,Monique Bezerra; Eiras,Marcelo; Nickel,Osmar; Pio-Ribeiro,Gilvan.
ABSTRACT: There is no molecular characterization of Brazilian isolates of Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV), except for those infecting peach. In this research, the causal agent of rose mosaic was determined and the movement (MP) and coat (CP) protein genes of a PNRSV isolate from rose were molecularly characterized for the first time in Brazil. The nucleotide and deduced amino acid sequences of MP and CP complete genes were aligned and compared with other isolates. Molecular analysis of the MP and CP nucleotide sequences of a Brazilian PNRSV isolate from rose and others from this same host showed highest identities of 96.7% and 98.6%, respectively, and Rose-Br isolate was classified in PV32 group.
Tipo: Info:eu-repo/semantics/report Palavras-chave: Diagnosis; Sequencing; Ilarvirus; PNRSV; ApMV; ArMV.
Ano: 2015 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782015001202197
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Detecção e identificação molecular de vírus associados a videiras sintomáticas e assintomáticas Ciência Rural
Basso,Marcos Fernando; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Ayub,Ricardo Antônio; Nickel,Osmar.
A propagação vegetativa da videira favorece infecções virais múltiplas, com expressão diferencial de sintomas em função da combinação da cultivar ou espécie da hospedeira com a espécie viral. Os objetivos deste trabalho foram detectar e identificar as espécies virais presentes em duas espécies/cultivares de videira: uma sintomática e outra assintomática. DsRNA de ambas as amostras foi submetido à RT-PCR com 17 pares de oligonucleotídeos específicos para a detecção de Grapevine virus A (GVA), Grapevine virus B (GVB), Grapevine virus D (GVD), Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine fanleaf virus (GFLV), Arabis mosaic virus (ArMV), Grapevine chrome mosaic virus (GCMV), Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV), Grapevine leafroll-associated virus 1 a 4...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: RSPaV; GLRaV-2; GLRaV-3; Vitis; Diagnose; Variabilidade.
Ano: 2010 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782010001100001
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Detection and partial molecular characterization of Grapevine fleck virus, Grapevine virus D, Grapevine leafroll-associated virus -5 and -6 infecting grapevines in Brazil Ciência Rural
Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Nickel,Osmar; Dubiela,Carla Rosa; Souto,Eliezer Rodrigues de.
Grapevine fleck, rugose wood and leafroll are three grapevine viral diseases whose causal agents (or associated viruses) respectively are Grapevine fleck virus (GFkV), Grapevine virus D (GVD) and Grapevine leafroll-associated virus 5 and 6 (GLRaV-5 and -6). The objective of this work was to perform a partial molecular characterization of local isolates of these four viral species that infect grapevines. The nucleotide and deduced amino acid sequences of complete genes of the coat protein (CP) (of GFkV), the CP and the RNA binding protein (of GVD), the CP and the partial hHSP70 gene (of GLRaV-5) and the partial hHSP70 gene (of GLRaV-6) were aligned and compared in silico with other isolates. These data extend the available information about Brazilian...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Diagnosis; Sequencing; Maculavirus; Vitivirus; Ampelovirus; Vitis.
Ano: 2012 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782012001200004
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Produção de antissoro policlonal utilizando a proteína capsidial recombinante do Rupestris stem pitting-associated virus Ciência Rural
Basso,Marcos Fernando; Fajardo,Thor Vinícius Martins; Eiras,Marcelo; Ayub,Ricardo Antônio; Nickel,Osmar.
O Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) é o agente causal das caneluras do lenho da videira. Este trabalho teve como objetivo produzir antissoro policlonal a partir da proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV e avaliar a sua especificidade e sensibilidade. O gene da CP do RSPaV, com 780pb, foi previamente caracterizado. Esse gene foi subclonado no sítio de restrição EcoRI, no vetor de expressão pRSET-B e o plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da CP em Escherichia coli. A CP, ligada a uma cauda de seis histidinas, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA a partir do extrato de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e...
Tipo: Info:eu-repo/semantics/article Palavras-chave: Videira; RSPaV; Detecção; Sorologia.
Ano: 2010 URL: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782010001100022
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