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El objetivo de este experimento fue obtener una arqueobacteria metanogénica en cultivo puro, aislarla, caracterizarla morfológicamente y conservarla mediante liofilización. El experimento fue realizado de enero a septiembre del 2012 en el laboratorio de Microbiología Ruminal y Genética Microbiana del Colegio de Postgraduados. Para el aislamiento se utilizó un medio de cultivo selectivo a base de formato y fluido ruminal clarificado (FOR-FR), la arqueobacteria aislada se caracterizó morfológicamente y se conservó mediante liofilización. Para la conservación se evaluaron tres alternativas 1) la arqueobacteria en medio de cultivo FOR-FR (A), 2) arqueobacteria en medio de cultivo FOR-FR con carbón activado adicionado antes de la inoculación (AC) y 3) arqueobacteria en medio de cultivo FOR-FR con carbón activado adicionado al finalizar la incubación (A+C). Después de la liofilización se evaluó la viabilidad microbiana en el medio de cultivo FOR-FR y la producción de CH4 el cual se captó en viales con solución salina y se midió en un cromatógrafo de gases. El medio de cultivo FOR-FR permitió aislar una arqueobacteria que genera colonias puntiformes en un periodo de tres a cuatro semanas. La liofilización con carbón activado adicionado antes de la inoculación fue el método adecuado para conservar dicha arqueobacteria porque mantuvo la viabilidad y actividad de los microorganismos aislados a partir de las 72 h de incubación. _______________ ISOLATION AND PRESERVATION OF METHANOGENIC ARCHAEBACTERIA. ABSTRACT: The objective of this trial was to obtain methanogenic archaebacteria in pure culture, isolate them, describe their morphology and preserve them through lyophilization. The trial was conducted from January to September of 2012 in the Ruminal Microbiology and Microbial Genetics laboratory of Colegio de Posgraduados. A selective culture medium based on formate and clarified ruminal fluid (FOR-RF) was used for the isolation process. The isolated archaebacteria were subjected to morphological characterization and were preserved through lyophilization. Three approaches were evaluated for the preservation 1) archaebacteria in FOR-RF culture medium (A), 2) archaebacteria in FOR-RF culture medium with activated carbon added before the inoculation (AC), 3) archaebacteria in culture medium FOR-RF with activated carbon added at the end of the incubation (A+C). After lyophilization, microbial viability and CH4 production were evaluated from culture medium FOR-RF, CH4 was collected in vials containing saline and its concentration was measured using gas chromatography. Archaebacteria developing a puntiform colony in a period ranging from three to four weeks were isolated from culture medium FOR-RF. Lyophilization with activated carbon added before inoculation was the appropriate method for the preservation of archaebacteria because it maintained the viability and activity of the isolated microorganisms after 72 h of incubation.
Tesis (Doctorado en Ciencias, especialista en Ganadería).- Colegio de Postgraduados, 2014.
Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología (CONACYT).
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